PCR प्रतिक्रियाहरूमा हस्तक्षेप कारकहरू

PCR प्रतिक्रियाको क्रममा केही हस्तक्षेपकारी कारकहरू प्राय: सामना हुन्छन्।
PCR को धेरै उच्च संवेदनशीलता को कारण, पिक्कार परिणामहरु मध्ये एक महत्वपूर्ण कारकहरु मध्ये एक मानिन्छ र गलत सकारात्मक परिणाम उत्पादन गर्न सक्छ।
समान रूपमा आलोचनात्मक रूपमा विभिन्न स्रोतहरू हुन् जुन गलत-नकारात्मक परिणामहरू निम्त्याउँछन्। यदि pcr मिश्रणको एक वा अधिक आवश्यक भागहरू वा Extlatificivic प्रतिक्रिया आफैंमा अवरोध वा हस्तक्षेप गरिएको छ भने, निदान विवादलाई बाधा दिन सकिन्छ। यसले कम दक्षता र गलत नकारात्मक परिणाम पनि निम्त्याउन सक्छ।
निषेधको लागि अवरोधको कारण, लक्षित न्यूक्लिकेक्स इमान्दारी अन्तर्गत शिपिंग र / वा भण्डारण सर्तहरूको कारण नमूना तयारी अघि। विशेष गरी, उच्च तापमान वा अपर्याप्त भण्डारण कोष र आणविक एसिडको क्षति हुन सक्छ। सेल र टिश्यु फिक्सेशन र प्याराफिन इम्बेडिंग डीएनए वस्तु र लगातार समस्याको प्रख्यात कारणहरू हुन् (आंकडा 1 र 2 हेर्नुहोस्)। यी केसहरूमा, इष्टतम एक्लोपना पनि र शुद्धीकरणले सहयोग गर्दैन।

चित्र 1 | डीएनएनएनए निष्ठामा अलमल्लीको प्रभाव
अगाजारिज जेल इलेक्ट्रोपोजसले देखाए कि पटपिन वर्गबाट ​​पटफिन सेक्सनबाट डीएनएको गुणस्तर एकदम भिन्न भिन्नताका साथ भिन्न थियो। विशिष्ट औसत अंशको डीएनए फिक्सामेन्ट विधिमा निर्भर गर्दछ। डीएनए केवल फ्रिज गरिएको नमूनाहरू र बफर फ्रुटेड तटस्थ औपचारिकनमा स्थिर हुँदा डीएनए संरक्षण गरिएको थियो। एक कडाईकालीन अम्लीय बौरन स्थिर वा अनबीफेड, औपचारिक एसिड-फराकिलो एसिडको प्रयोगले DNA को एक महत्वपूर्ण घाटामा परिणामस्वरूप परिणामस्वरूप। बाँकी अंश अत्यधिक खण्डित छ।
बाँयामा, टुक्राहरूको लम्बाई हत्यारा जोडीमा व्यक्त गरिएको छ (KBP)

चित्र 2 | आणविक एसिड लक्षितहरूको अखण्डता गुमाउने
(a) a 3'-whowd 'दुबै स्ट्रेन्डहरू मा दुबै स्टेशन डीना डीएनएमा ब्रेक हुनेछ। डीएनए को ऑन्टेसिस अझै सानो टुक्रा मा हुनेछ। जहाँसम्म, यदि एक premer anneaning साइट dna अंश मा हराइरहेको छ, मात्र लाइनर प्रसूतान्त्रिक देखा पर्छ। सबैभन्दा अनुकूल मामलामा, टुक्राहरूले एक अर्कालाई पुनच्याउन सक्छ, तर उत्पादनहरू साना र चित्रित स्तरहरू हुनेछन्।
(ख) आधारहरू घाटा, मुख्यतया संकुचन र तपाईंको फिमाइडाइन डिमर गठनको कारण, h-बन्डको संख्यामा कमी हुन्छ र टीममा कमी हुन्छ। विस्तारित ताप चरणको समयमा प्राइमरहरू म्याट्रिक्स डीएनएबाट पग्लिनेछन् र कम कडा परिस्थितिहरूमा पनि हान्न सक्नेछैन।
(c) छेउछाउको तपाइँको आधारहरू एक tt डिमर गठन।
अर्को साझा समस्या जुन अणु निदानमा हुन्छ अणु निवासमा हुन्छन-क्लोरोलफर्म निकासीको तुलनामा लक्ष्य आणविक एसिड भन्दा कम समयसीदार रिलीज हो। चरम अवस्थामा यो गलत नकारात्मकसँग सम्बन्धित हुन सक्छ। सेल मलबेसको उमालेको लिसिस वा एन्जार्ममासिक पाचनले धेरै समय बचत गर्न सकिन्छ, तर यस विधिले अपर्याप्त आणविक एसिड रिलीजमा कम पीसीआर संवेदनशीलतामा परिणाम दिन्छ।

प्रवर्धन को बखत plymemeage गतिविधि को अवरोध

सामान्यतया, अवरोधहरू एक कन्टेनर अवधारणाको रूपमा प्रयोग गरिएको सबै कारकहरू वर्णन गर्न प्रयोग गरिन्छ जुन सबपल्टिमल pcr परिणामहरू निम्त्याउँदछन्। कडाईका साथ जैत बायोकेमिक अर्थमा, अवरोध एन्जाइमको गतिविधिमा सीमित छ, अर्थात् डीएनए पोलिमेस्टरको सक्रिय साइटको साथ प्रतिस्पर्धा-उत्पादन परिवर्तन गर्नुहोस् (उदाहरणका लागि, MG2 + Tak dnymageer को साथ।
नमूना वा विभिन्न बफरमा कम्पोनेन्टहरू र संलग्नहरू समावेश गर्दछ एन्जाइमलाई सिस्ट्यान्ड गर्नुहोस् वा यसको काफ्लाहरू) (उदाहरण EDTA) लाई जादूगर वा गलत नकारात्मक pcr परिणामहरू।
यद्यपि, प्रतिक्रिया कम्पोनेन्टहरू बीच धेरै अन्तर्क्रियाहरू र अनपेक्षित एसिडहरू सहितको 'pcr अवरोधहरू' को रूपमा तोकिएका छन्। एक पटक सेल को अखण्डता एक्लोपनाले अवरुद्ध द्वारा अवरुद्ध भयो, नमूना र यसको वरपरको समाधान र ठोस चरण हुन सक्छ। उदाहरण को लागी, 'SCARENGERS' एकल- वा twiceiplation ्गीन डिस्पोजल अन्तर्क्रियाको संख्या कम गर्न र अन्ततः pcr प्रतिक्रिया भाँडामा पुग्दा लक्ष्यहरूको संख्या कम गर्दछ।
सामान्यतया, PCRR अवरोधहरू (URETASS, मूत्रमा, रक्तपार्धन, गाईको मोटिन (जलिज, क्यान + + + + + + + + + + + + + + + + )mentsmentsहरू) र

अधिक प्रचुर pcr recr अवरोधकहरू ब्याक्टेरिया र इसुरीटिक कोषहरू, गैर-लक्षित डीना, टिश्यु र प्रयोगशाला उपकरणहरू, डॉय-लन्डरिंग म्यान्रोरोललहरू र प्रयोगशाला उपकरणहरू जस्तै पञ्जा र प्लास्टिकहरू जस्ता छन्। स्थानिक एसिडहरूको शुद्धिकरण pcr अवरोधहरू हटाउनको लागि रुसी गरिएको विधि हो।
आज, विभिन्न स्वचालित निकासी उपकरणले धेरै म्यानुअल प्रोटोकलहरू बदल्न सक्छ, तर 100% रिकभरी र / वा लक्ष्यहरूको शुद्धिकरण प्राप्त भएको छैन। सम्भावित अवरोधकहरू अझै शुद्ध पारस्परिक एसिडमा उपस्थित हुन सक्छन् वा पहिले नै प्रभाव लिइसकेका हुन सक्छन्। बिभिन्न रणनीतिहरू अवरोधकर्ताहरूको प्रभाव कम गर्न अवस्थित छन्। उपयुक्त पोल कीराको छनौटले अवरोध गतिविधिमा महत्वपूर्ण प्रभाव पार्न सक्छ। PCR अवरोधलाई कम गर्न अन्य प्रमाणित विधिहरू पोलीमेज ट्राफ्यूट बढाउँदैछन् वा BSA जस्ता अन्य थप्न प्रयोग गर्दैछन्।
PCR प्रतिक्रियाहरूको अवरोध आन्तरिक प्रक्रिया गुणवत्ता नियन्त्रण (आईपीसी) को प्रयोगबाट प्रदर्शन गर्न सकिन्छ।
एथेनोल, एड्टाओल, चीन, गुयूब, गुडेल, Gusl, gsho, gusl, gusl, gusl, gusl, gusl, gusl, gusl, gusl, gusl, gusl, gusl, ssoprool र pushol देखि सबै reagtes र अन्य समाधानहरू हटाउन सकिन्छ। तिनीहरूको एकाग्रतामा निर्भर गर्दै, तिनीहरू सक्रिय वा अवरोध गर्न सक्छन्।